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禽白血病病毒J亚群env基因产物的抗原性分析_论文

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维普资讯 http://www.cqvip.com 4 2卷 1 期  2O 0 2年 2月   微  生  物  学  报  A 衄 Mi o i c c b  ̄ - S /  r o a /c  na Vo . 2 14   No    1 F bu r  2 O   erav O2 禽 白血 病病 毒 J亚群 ev基 因产 物的抗 原 性 分析  n 秦爱建  刘岳龙  金文杰   ( 扬州 太 学 畜牧 兽 医 学 院 动 物 医学 粟 扬州 25 ) 2呻9  L c e  MyF d   uvLe  a l v t  ̄mld A'  … i …a d n ∞k  /brt ̄ , D Eat【 s g Ml 8 2   A) a oao US A, s ∞   ,   8 3US   n 4 摘 要 : P R扩 增方 法 将 A VJ 用 C L—  删 基 因 不 同 片段 进行 了克 隆 , 构 建 了 m  因 片段 G T 并 基 S  融 台 蛋 白载 体 。用 Wee  lt 验 证 明 大肠 杆 菌 表 达 的不 同 e 基 因 片 段 的 G T融 合 蛋 自 s r bo实 t n   S   能 与 相应 的单 克 隆抗 体 产 生 特 异 性 反 应性 , 克 隆抗 体 J9和 G 单 E 2识 别 的 抗 原 位 点 位 于 g8  p5 的氨 基 酸 6 5—15区域 . 【 5 而 4 5识 别 的 抗 原 表 位 位 于 删 基 因 的 另 一 区 域 (5 ~23位 氨基  16 3 酸 ) L - 氨 基 酸 多 肽 而 非 糖基 化 位 点 决 定 A VJ 亚 群 特 异 性 。 。A VJ L—的   美 键 词 : 白血 病 病 毒 . 亚群 . 舢 基 因 , 达 , 原 分 析  禽 J e 表 抗 中 围分 类 号 : 994 Q 3    文献 标识 码 :  A 文 章 编 号 : 0一29【02 0一o90  ∞ l 0 20 ) I 9—6 6 0 禽 白血病 病毒 ( L 基 因组 的主 要组 成 包括 三 个 部 分 即编 码 病 毒 内部 结 构 蛋 白 的  A V) gg基 因 , 码 R A依 赖性 的 D A聚合 酶 或反 转 录酶 的  a 编 N N 基 因和 编 码 包膜 蛋 白的 e1 1  1 3 基 因… 。A v亚群特 异性 由 —  因编码 的蛋 白所决 定 ,  基 因编 码 有 两个 蛋 白 , 一  L 基 e 其 是 表 面包膜蛋 白 g 8 , p 5 其二是 穿膜蛋 白 p3 。p3 g7 g7使 g8 p 5定着 于细胞 膜 上 。 m  因含  基 有 2个高 变区 hl h2和 3个 可变 区 vlv2 v3 r 、r r 、r 、 。高 变 区和可 变 区是 决 定 A v的中和 性  r L 和特异性 的关键 区域 , 区的某一个 碱基 或某 一 个 氨基 酸 的改 变将 影 响病 毒 的 特性 。不  该 同毒株 的差异性 主要 在高变 区和 可变 区。19 年 , an 及其 同事  报道 的新 的非急性 转  9 1 Py e 化 性禽 白血病病 毒 为 J 亚群 , 生物学 分析揭 示 了 J 亚群病 毒不 同 于过去 的 A E病 毒亚 群 , —   J 群包 膜基 因可能 是通过 一个 或几个外 源性 病毒 和 内源性 病 毒多次 重组 而 产生  ( a 亚 Bi   等 19 ,e o 9 5 Br n等 19 ) m 9 8 。*几 年来 , L . 已呈 流 行 趋势 。 根据 A vJ的致 病 特 点和 广  A VJ L. 泛 的宿 主范 围 , 究其 包膜 的生物学 和 生物 化 学 特性 , 有 助 于 了解 A V J的致病 机 制 , 研 将 L.   从 而提 出控制 A V J L . 的程序 。为此 , 我们对 其包 膜基 因进 行 了克隆和 表达 , 对其抗 原特 性  进 行 了分析 。   1 材 料 和 方 法  1 1 抗 体  . 特 异性抗 A V J 膜糖 蛋 白单 克隆抗体 G . 、 9 3和 I L .包 23 J 4 E 4 5系用 杆状病 毒 系 统 S9细  f 胞 表达 的 m 基 因产物 免疫小 鼠, 其脾 细胞 与小 鼠骨髓 瘤 细胞 N 1细胞 经 P G融合 筛  取 S E 选 而制 成  。   ’ 苏 省教 育 厅 自然 基 盘 重点 项 日( O J2 00 )教 育部 基 盘  江 O KB 302 ; 作 者 俺舟 : 爱 建 (9 1 , , 秦 16 一)男 江苏 通 州 ^ . 为 扬州 太 学 教 授 , 士  主 要研 究 方 向 动 物 分 子病 毒 学 和 免 疵 学 。 现 博   收 稿 日期 :O l l 1 . 回 日期 :0 I 3 6 2O ̄l 2 修 一 2O- —   0 2 维普资讯 http://www.cqvip.com l0 0  微  生  物  学  报  12 郭融 . 5不 同 基 因 区域 片 段 的 P R 扩 增  C 根据 已报道 的 A V JH R 13 的前 D A序列  进 行 g8 L — P S0 株   N p5的高变 区 和 可变 区 h2  r、 h3 v 、 3 g 3 r、r v 和 p 7的 P R引 物设 计 ( 1 , 2 r C 图 ) 再根 据计 算 机对 P R引物 的分 析 , 引物 序  C 对 列稍作 上下 游调整 。设 计的引 物 的序 列组 成如 :   弓 物 1 5 c G T c G G G T A c Arc   『    G G A c G G A T c T T r 3 T 引 物 2 5 G T G C A A T T C A 3 q"3  



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